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PLoS Biology | 30秒内完成!一种简单、快速、高效的核酸提取方法

信息来源:PLoS Biology  发布时间: 2021-05-17   点击数:保护视力色: 杏仁黄 秋叶褐 胭脂红 芥末绿 天蓝 雪青 灰 银河白(默认色)

核酸提取是各种分子生物学实验中所必需的一个技术,然而核酸的提取通常需要繁琐的步骤,并且需要一定的仪器设备。开发一种简单、快速和高效的核酸提取方法可以极大的节省人力、物力和财力。

来自澳大利亚昆士兰大学植物遗传工程实验室的研究人员在PLoS Biology上发表了一篇题为 Nucleic acid purification from plants, animals and microbes in under 30 seconds 的论文。在该研究中,科研人员开发了一种新的核酸提取方法,利用滤纸可以在30秒内从植物、动物和微生物中快速的完成核酸的提取和纯化,而且成本非常低(每个样品的成本可低至0.06美元)。

该方法用到的材料是Whatman No.1滤纸 (GE Healthcare, USA),研究者在论文中提到也可以用其它滤纸。经过一系列的实验,研究人员证明滤纸可以有效的纯化DNA。

随后,研究者将滤纸处理制作成更易于操作的试纸条。将Whatman No.1滤纸的一半浸泡在熔化的蜡中(Paraplast Plus, Fluka),浸过蜡的滤纸可以防水,产生一个疏水区域。然后将滤纸裁成44 mm的长方形,其中40 mm有蜡覆盖,而4 mm没有经过蜡处理,随后把这个长方形条切割成宽大约2毫米的试纸条,这样每根试纸条上具有一个核酸结合区(实际上就是没有蜡的滤纸)和一个手柄(就是泡过蜡,疏水并且好拿)。

具体的提取过程如下(以植物叶片为例):
1. 将叶片浸入到含有500 μL裂解液(20 mM Tris [pH 8.0], 25 mM NaCl, 2.5 mM EDTA, 0.05% SDS)和合金珠的试管中。
2. 将试纸条浸入到粗提液中以结合核酸,大约3秒。
3. 将试纸条浸入到清洗液中(10 mM Tris [pH 8.0], 0.1% Tween-20),去掉杂质,大约3秒。
4. 最后把试纸条浸入到扩增反应液中,将核酸洗脱下来,大约3秒。
5. 洗脱液可以直接作为PCR扩增的模板。

该技术可用实现在没有专业设备或人员的情形下在短短30秒内提取DNA和RNA,消除了对用于样品制备的专业实验室的需求,而且比任何现存的其他技术更加简单、更加快速和更加便宜。

利用试纸条提取核酸的流程